Immortalized Vs Transformed cells

In vitro, normal cells taken directly from an animal (referred to as primary cells) can only divide a certain number of times (cells will either enter a senescence stage, or die). Transformed cells are cancerous cells. They possess all six hallmarks of cancerous cells : 1- Growth factor independency2- No response to growth inhibitors3- Evasion of apoptosis4- Can promote…

Shotgun sequencing

For sequencing long DNA, even an entire chromosome. Not reliable in case of DNA with lots of repetitions (need to use the sequencing method based on BACs). Steps Random DNA fragmenation (restriction enzymes or physical fragmenation) Sequencing of individual fragments. Assembly of the fragments sequences by computer on the basis of their overlapping regions.

RACE PCR

On connait la séquence codante du gène étudier , donc de l’ATG au codon stop. on ne connait pas les extrémités 5’UTR et 3’UTR de l’ARNm   5′ RACE PCR: but = amplifier uniquement la région  5’UTR de l’ARNm, en passant par l’ADNc. cela permet ensuite de ne séquencer que cette région au lieu de…

La démarche transcriptome

 But: déterminer le profil de transcription des gène d’un organisme donné dans une condition donnée, ou comparer le profil de transcription d’un meme organisme dans différentes conditions et diterminer ainsi les gènes dont la transcription est lié à une condition donnée. Etapes: Prélèvement d’un échantillon, ou culture, de cellules en condition A et d’autres en…

Dot Blot

But: Détection et quantification de l’ADN ou de l’ARN ou des protéines cibles. Différence avec Southern Blot Northern Blot : dépôt des échantillons directement sur une membrane de nitrocellulose, sans séparation préalable. (+) Le dot est bien sur plus rapide est de nature a etre utiliser en routine dans des aplication medicale ou industrielle. (-)…

Les vecteurs

I) Définition: Petites molécules d’ADN possédant leur propre système de réplication(origine de replication). Ils servent de véhicule pour le clonage génique. vecteur natif = vecteur sans insert Vecteur recombiné = vecteur + insert II) Caractéristiques des vecteurs: 1. réplication épisomale (facteur sexuel F): réplication indépendante de l’ADN de la cellule hôte. 2. petite taille: pour permettre l’insertion…